化學性質實驗報告

時間:2020-10-08 12:40:07 報告 我要投稿

化學性質實驗報告

  有機實驗報告

  糖、氨基酸和蛋白質的鑒定

化學性質實驗報告

  一、糖的鑒定

  糖類化合物:又稱碳水化合物,是多羥基醛或多羥基酮及其縮聚物和某些衍生物的總稱,一般由碳、氫與氧三種元素所組成。

  實驗目的:

  (1)進一步了解糖的化學性質; (2)掌握鑒定糖的方法及其原理。

  (一)-萘酚試驗(molish)糖類化合物一個比較普遍的定性反應是molish反應。即在濃硫酸存在下,糖與-萘酚(molish試劑)作用生成紫色環。

  實驗方法

  取3支試管,編號,分別加入0.5 ml 0.5%的各待測糖水溶液,滴入2滴molish試劑( -萘酚的乙醇溶液),搖勻。把試管傾斜450,沿管壁慢慢加入約1ml濃硫酸(切勿搖

  動),小心豎直后仔細觀察兩層液面交界處的顏色變化。硫酸在下層,試液在上層 樣品:葡萄糖、蔗糖及淀粉

  解釋:

  糖被濃硫酸脫水生成糠醛或糠醛衍生物,后者進一步與

  -萘酚縮合生成紫紅色

  物質,在糖液和濃硫酸的液面間形成紫色環。

  (二) fehling試驗

  (1)實驗原理

  fehling試劑:含有硫酸銅和酒石酸鉀鈉的氫氧化鈉溶液。

  硫酸銅與堿溶液混合加熱,生成黑色的氧化銅沉淀。若同時有還原糖存在,則產生黃色或磚紅色的氧化亞銅沉淀。為防止銅離子和堿反應生成氫氧化銅或堿性碳酸銅沉淀,fehling試劑中需加入酒石酸鉀鈉,它與cu2+形成的酒石酸鉀鈉絡合銅離子是可溶性的絡離 子。

  (2)操作方法

  取4支試管,編號,分別加入fehling試劑i和ii 各0.5ml。搖勻并置于水浴中微熱后,分別加入5滴待測糖溶液,振蕩后置于沸水浴中加熱2 ~ 3min,取出冷卻,觀察顏色變化及 有無沉淀析出。fehling試劑 i:稱取3.5 g硫酸銅溶于100 ml蒸餾水中, 得淡藍色的 fehling試劑 i。

  fehling試劑 ii:將17g酒石酸鉀鈉溶于20ml熱水中,然后加入20 ml含

  5 g naoh的水溶液,稀釋至100 ml得無色透明的

  fehling試劑 ii。

  樣品:葡萄糖、果糖、蔗糖及麥芽糖

  解釋: 硫酸銅與堿溶液混合加熱,生成黑色的.氧化銅沉淀。若同時有還原糖存在,則產 生黃色或磚紅色的氧化亞銅沉淀。

  (三) benedict試驗

  (1)實驗原理:benedict試劑是fehling試劑的改良。benedict試劑利用檸檬酸作為 cu2+的絡合劑。

  benedict試劑: 取17.3 g檸檬酸鈉和10 g 無水碳酸鈉溶于80 ml水中,再取1.73 g結晶的硫酸銅溶解在10 ml水中,慢慢將此溶液加入上述溶液,用水稀釋至100 ml得 benedict試劑。

  (2)操作方法

  用benedict試劑代替fehling試劑 重復以上實驗,取4支試管,編號,分別加入benedict試劑

  0.5ml。搖勻并置于水浴中微熱后,分別加入5滴待測糖溶液,振蕩后置于沸水浴中加 熱2 ~ 3min,取出冷卻,觀察顏色變化及有無沉淀析出。

  樣品:葡萄糖、果糖、蔗糖及麥芽糖

  解釋: 硫酸銅與堿溶液混合加熱,生成黑色的氧化銅沉淀。若同時有還原糖存在,則產

  生黃色或磚紅色的氧化亞銅沉淀。

  (四) 成脎試驗

  (1)實驗原理: 單糖與過量的苯肼作用生成糖脎,糖脎是不溶于水的黃色晶體。不同的糖脎,其晶形、熔點及生成速度大都不同,所以可通過成脎試驗區別不同的還原性糖。由于成脎反應是發生在c1和c2上,不涉及糖分子的其他部分,所以葡萄塘、果糖都能生成相 同的脎。但由于成脎的速度不同,仍然是可以區別的。 (2)操作方法

  在試管中加人1 ml 5%的樣品溶液,再加入0.5 ml 10%的苯肼鹽酸鹽溶液和0.5 ml 15%的乙酸鈉溶液,在沸水浴中加熱并振搖,記錄并比較形成結晶所需要的時間。并在低倍 顯微鏡下觀察脎的結晶形狀。

  樣品:葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、果糖

  注意: 苯肼有較高毒性。取用時慎勿觸及皮膚。若已發生皮膚沾染,先用稀醋酸洗,再 用清水洗凈。

  解釋: 單糖與過量的苯肼作用生成糖脎,糖脎是不溶于水的黃色晶體。不同的糖脎,其晶形、熔點及生成速度大都不同,所以可通過成脎試驗區別不同的還原性糖。

  (五)tollens試驗

  在洗凈的試管中加入1 ml tollens 試劑, 在加入0.5 ml 5%糖溶液,在50 oc 水浴中溫

  熱,觀察有無銀鏡生成。

  樣品:葡萄糖,果糖,麥芽糖,蔗糖

  解釋: (六)淀粉水解試驗

  (1)實驗原理: 淀粉是葡萄糖的高聚體,在餐飲業又稱芡粉,通式是

  (c6h10o5)n。淀粉在酸的催化作用下,能發生水解;淀粉的水解過程:先生成分子量較小的糊精(淀粉不完全水解的產物),糊精繼續水解生成麥芽糖(雙糖),最終水解產物是葡萄糖(單糖),其與fehling

  試劑作用可發生顯色反應。

  (2)操作方法: 在試管中加入3 ml淀粉溶液, 再加入0.5 ml 20%稀硫酸,將試管放在沸水中加熱5 min,然后取出試管冷卻后用10%naoh溶液中和至中性。取2滴與fehling試劑 作用,觀察有何現象發生?

  現象:產生磚紅色沉淀

  解釋:淀粉是葡萄糖的高聚體,淀粉在酸的催化作用下,能發生水解;淀粉的水解過程:先生成分子量較小的糊精(淀粉不完全水解的產物),糊精繼續水解生成麥芽糖(雙糖),最終水解產物是葡萄糖(單糖),其與fehling試劑作用可發生顯色反應。

  二、氨基酸及蛋白質的鑒定

  氨基酸:含有氨基和羧基的一類有機化合物的通稱,是含有一個堿性氨基和一個酸性羧基的有機化合物。氨基酸是蛋白質的基本組成單位。

  蛋白質:是由氨基酸以酰胺鍵形成的復雜高分子化合物,是生物體的基本組成物質。 實驗目的:

  (1)了解構成蛋白質的基本結構單位及主要連接方式。

  (2)掌握蛋白質和某些氨基酸的顯色反應原理。

  (3)學習幾種常用鑒定蛋白質和氨基酸的方法。

  (一)茚三酮反應

  (1)實驗原理

  -氨基酸或含有游離氨基的蛋白質的水解產物與茚三酮水溶液共熱,能生成藍紫色化合物。這是-氨基酸特有的反應,因此常用于-氨基酸的定性或定量測定。

  (2)操作方法

  取3支試管,編號后分別加入4滴0.5%的甘氨酸、酪蛋白和蛋白質 溶液,再加入2滴0.1%的茚三酮-乙醇溶液,混合均勻后,將試管放在沸水浴中加熱1~2min,觀察并

  比較3支試管顯色的先后次序。

  樣品:甘氨酸、酪蛋白和蛋白質

  解釋:

  (二)雙縮脲反應

  (1)實驗原理:尿素加熱至180℃左右,生成雙縮脲并放出一分子氨。雙縮脲在堿性 環境中能與cu2+結合生成紫紅色化合物,此反應稱為雙縮脲反應。

  由于蛋白質分子中有肽鍵,其結構與雙縮脲相似,因此也能發生此反應生成藍色、紫色或紅色的銅鹽配合物。氨基酸因不含肽鍵,故除組氨酸外都不發生此反應。

  nh2

  —

  co

  —nh—co—nh2

  (雙縮脲)

  (2)操作方法:取1支試管,加入10滴蛋白質溶液和15-20滴10%naoh溶液,混合均 勻后,再加入3-5滴5%硫酸銅溶液,邊加邊搖,觀察有何現象。

  現象:變成藍色溶液

  解釋:尿素加熱至180℃左右,生成雙縮脲并放出一分子氨。雙縮脲在堿性環境中能與 cu2+結合生成紫紅色化合物,此反應稱為雙縮脲反應。

  由于蛋白質分子中有肽鍵,其結構與雙縮脲相似,因此也能發生此反應生成藍色、 紫色或紅色的銅鹽配合物。

  (三)黃色反應

  (1)實驗原理:幾乎所有的蛋白質與濃硝酸作用產生黃色,黃色物質在堿性溶液中進一步形成橙紅色。這是因為多數蛋白質分子都含有帶苯環的氨基酸,產生黃色的硝化物。

  (2)操作方法:

  (a) 取一支試管,加4滴蛋白質溶液和2滴濃硝酸(由于強酸作用,蛋白質出現白色沉淀),然后置于水浴中加熱,沉淀變成黃色,冷卻后,逐滴加入10%naoh溶液至溶液呈 堿性,觀察顏色的變化。

  (b)取一支試管,加4滴0.1%苯酚溶液代替蛋白質,重復上述操作,觀察顏色的變化。 (c)取一支試管,加入少量指甲,再加入5-10滴濃硝酸,放置10min后,觀察指甲的 顏色變化。

  (四)醋酸鉛反應

  操作方法

  取一支試管, 加1 ml 0.5%醋酸鉛溶液,再逐滴加入1%naoh溶液,直到生成的沉淀溶解為止,搖動均勻。再加入5-10滴蛋白質溶液,混合均勻,在水浴上小心加熱,待溶液變成棕黑色時,將試管取出冷卻,再小心加入2 ml濃鹽酸。觀察有何現象產生,并

  嗅其味,判斷是什么物質。

  現象:產生大量白色,具有刺激性氣味的氣體 。該氣體是硫化氫氣體

  解釋:蛋白質分子中常含有半胱氨酸和胱氨酸,含硫蛋白質在強堿條件下,可分解形成硫化鈉。硫化鈉和醋酸鉛反應生成黑色的硫化鉛沉淀。若加入濃鹽酸,就生成有臭味的硫化氫氣體。r-sh+2naoh → r-oh+nas+ho 22

  na2s+pb+2 →

  pbs↓ +2na+ pbs +2hcl→ pbcl+hs↑ 22

  

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